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層析技術(shù)是近代生物化學(xué)常用的分離技術(shù)之一。它是利用混合物中各組分的理化性質(zhì)(吸附力、分子形狀和大小、分子極性、分子親和力、分配系數(shù)等)的差異,在兩相運(yùn)動(dòng)中,不斷地進(jìn)行交換、分配、吸附及解吸附等過程,可將各組分間的微小差異經(jīng)過相同的重復(fù)過程而達(dá)到分離。配合相應(yīng)的光學(xué)、電學(xué)和電化學(xué)檢測(cè)手段,可用于定性、定量和純化某種物質(zhì),其純度高達(dá)99%。層析法的特點(diǎn)是分離率、靈敏度(pg-fg級(jí))、選擇性均高的一種分離方法。尤其適合樣品含量少,而雜質(zhì)含量多的復(fù)雜生物樣品的分析。
層析冷柜就是采用這種技術(shù),專為生化層析實(shí)驗(yàn)而研制的特殊用途冷柜,主要用在生命科學(xué)研究的高校學(xué)科和科研院所,主要用來進(jìn)行各種酶類,肽類,大分子,核酸等物質(zhì)的生化層析分析試驗(yàn)。也可用于其他需要低溫環(huán)境的實(shí)驗(yàn),或用于物品冷藏。層析冷柜專門為對(duì)溫度要求很高的各種應(yīng)用設(shè)計(jì),可以在箱內(nèi)操作層析設(shè)備和其它簡(jiǎn)易安裝的儀器和設(shè)備。
使用原理如下:
生物分子間存在很多特異性的相互作用,它們之間都能夠?qū)R欢赡娴慕Y(jié)合,這種結(jié)合力就稱為親和力。親和層析就是通過將具有親和力的兩個(gè)分子中一個(gè)固定在不溶性基質(zhì)上,利用分子間親和力的特異性和可逆性,對(duì)另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。被固定在基質(zhì)上的分子稱為配體,配體和基質(zhì)是共價(jià)結(jié)合的,構(gòu)成親和層析的固定相,稱為親和吸附劑。
親和層析時(shí)先選擇與待分離的生物大分子有親和力物質(zhì)作為配體,并將配體共價(jià)結(jié)合在適當(dāng)?shù)牟蝗苄曰|(zhì)上。將制備的親和吸附劑裝柱平衡,當(dāng)樣品溶液通過親和層析柱的時(shí)候,待分離的生物分子就與配體發(fā)生特異性的結(jié)合,從而留在固定相上;而其它雜質(zhì)不能與配體結(jié)合,仍在流動(dòng)相中,并隨洗脫液流出,這樣層析柱中就只有待分離的生物分子。通過適當(dāng)?shù)南疵撘簩⑵鋸呐潴w上洗脫下來,就得到了純化的待分離物質(zhì)。
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